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Techniques de base de marquage moléculaire pour la caractérisation et l’amélioration des plantes

Mémoire de fin d’études soutenu par Mouhamed Ould Cheikh Sow, le 12 Novembre 2010 à l’UCAD, Département de Biologie Végétale

Résumé
Ce travail effectué au laboratoire de biochimie /biologie moléculaire du CERAAS /ISRA de Thiès porte sur les techniques de base du marquage moléculaire utilisées dans la caractérisation et la sélection des plantes. Ces techniques vont de l’extraction d’ADN à sa révélation sur gel en passant par l’amplification PCR (Polymerase Chain Reaction). Les méthodes d’extraction d’ADN, MATAB (Mixed Alkyl Trimethyl Ammonium Bromide) et CETAB (Cetyl trimethylammonium Bromide) ont été utilisées pour respectivement les feuilles séchées de niébé (Vigna unguiculata L. walp) et fraiches de poughére (jatropha curcas). Les méthodes utilisées ont permis d’obtenir suffisamment d’ADN génomique (20 à 100ng/bande) pour réussir l’amplification PCR en utilisant l’amorce RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA), OPB 05 pour le jatropha curcas et l’amorce SSR (Simple Sequence Repeats) VM39 pour le niébé. L’amorce VM39 a amplifié tous les individus testés et a révélé, sur gel de polyacrylamide un polymorphisme de longueur net entre ces derniers. L’amorce RAPD OPB05 a révélé sur gel d’agarose, un taux d’amplification de 81.25% et un polymorphisme net de présence/absence de bandes. Ces amorces seraient donc recommandées pour les études de caractérisation génétique du niébé et du jatropha.

Mots-clés : techniques de base de marquage moléculaire, extraction d’ADN, PCR, révélation sur gel, technique RAPD, technique SSR, niébé, jatropha.